Microscopia Óptica

Na aula inicial de Práticas de Laboratório, o conteúdo é voltado para a Microscopia.

O objetivo geral é aplicar os princípios do manuseio do microscópio de luz, compreender as técnicas de preparo histológico e a afinidade tintorial dos tecidos.
Mas, o que é um microscópio de luz?  
Também chamado de microscópio óptico, é um instrumento utilizado para ampliar e observar estruturas pequenas dificilmente visíveis ou invisíveis a olho nu. O microscópio óptico utiliza luz visível e um sistema de lentes de vidro que ampliam a imagem das amostras.
O que significa técnicas de preparo histólogico?
A correta observação de material biológico pela microscopia óptica, implica uma série de procedimentos técnicos prévios designados por técnicas histológicas. 
Por fim, o que quer dizer afinidade tintorial?
Relaciona-se com a análise da basofilia e acidofilia de um determinado tecido a partir da sua afinidade com colorações ácidas ou básicas.
 
Após esses conhecimentos, a aula pode prosseguir.
Inicialmente a tarefa é identificar as partes do microscópio.

1. Lentes oculares: duas lentes que ampliam a imagem formada pelas objetivas e ajusta as possíveis deficiências ópticas.

2. Objetivas: sistema de lentes com diferentes aumentos (4x, 10x, 40x e 100x), podendo variar de número de acordo com o microscópio.

3. Pé: trata-se do apoio e ponte de fixação do microscópio.

4. Braço: também chamada de coluna; fixo na base/pé, serve de suporte para o restante do microscópio.

3. Platina: também chamada de mesa; serve para manter fixa a lâmina a ser observada; possui uma passagem de vidro, onde os raios de luz atravessam, além dos parafusos dentados que permitem o deslocamento do material.

4. Fonte de Luz: é a lâmpada do sistema, por onde sai a luz.

5. Diafragma: responsável pela uniformidade da iluminação e redução/ampliação da região iluminada.

6. Revólver: ferramenta que gira, e sua função é fornecer suporte às objetivas, assim como, trocá-las.

7. Charriot: responsável pela movimentação lateral da lâmina em observação, assim é possível sua visualização panorâmica.

8. Parafuso Macrométrico: objeto que sofre rotação permitindo a movimentação vertical da platina.

9. Parafuso Micrométrico: responsável pelos movimentos verticais e delicados da platina, para o aperfeiçoamento da focagem.

Posteriormente, é possível verificar as afinidades tintoriais a partir da lâmina do fígado.

* verifica se o charriot está em seu limite inferior pela movimentação do parafuso micrométrico.

* verifica se a objetiva de 4x está posicionada em frente à fonte de luz

* posiciona a lâmina do fígado de forma correta no charriot, prendendo-a com a platina.

* liga o microscópio e ajusta as oculares

* utiliza o parafuso macrométrico para subir o charriot até visualizar o aparecimento da imagem pelas oculares.

* ajusta o foco utilizando os parafusos macro e micro, e observa o órgão numa visão panorâmica.

Após todo esse processo, chega o foco principal da aula: 

* passa para a objetiva de 10x e o foco é ajustado apenas no parafuso MICROmétrico.

Então, é possível visualizar o núcleo e o citoplasma das células do fígado, também chamados de hepatócitos, dando ênfase para a coloração, a fim de determinar a afinidade tintorial.

Considerações:

A hematoxilina é básica, por isso se liga à substâncias ácidas, como os ácidos nucleicos que estão no núcleo/no DNA; além disso, possui uma coloração roxa ou azul.

A eosina é ácida, por isso se liga às substâncias básicas, como as proteínas básicas do citoplasma; além disso, possui uma coloração rosa ou vermelha. 

É essencial ter conhecimento sobre a quantidade de aumento que foi feito, de acordo com cada objetiva. Assim, o cálculo é feito pegando o valor da objetiva e multiplicando sempre por 10. Dessa forma, na objetiva de 4x foi realizado um aumento de 40 vezes. Na objetiva de 10x o aumento foi de 100 vezes. Na objetiva de 40x visualiza-se a imagem em um aumento de 400 vezes. E por fim, na de 100x, o aumento é de 1000 vezes.

Os principais tecidos do corpo humano são: o epitelial, o conjuntivo, o muscular e o nervoso.